每年的5-7月是手足口病的高发期，5岁以下儿童多见，而重症手足口病大多数年龄小于3岁。每年的这时候，各家的消毒产品都会蜂拥而上。而这些消毒剂是否真的能够灭活手足口病毒，只有经过了正规机构的病毒灭活试验，才能信任。那么病毒灭活试验测试要经过哪些流程呢？一起来看看正规机构中科检测的病毒灭活试验测试流程吧。

病毒灭活试验测试：仪器设备

低温冰箱(-20℃、-80℃)、生物安全柜（Ⅱ级)、液氮罐、倒置显微镜、离心机、二氧化碳培养箱、恒温器、数字可调移液器、T25细胞培养瓶与96孔培养板、生物安全二级(BSL-2）实验室。

病毒灭活试验测试：病毒悬液的制备

细胞传代：

1）准备：生物安全柜、实验用品（试管架、洗耳球等用紫外线照射30nir~60mir。

2）润洗：从培养箱中取出要传代的细胞培养瓶，在生物安全柜内无菌操作开盖，吸弃瓶内旧培养液，加入约3mL PBS，轻轻吹打，润洗细胞，然后将洗液完全吸弃。

3）消化：加入1mL~1.5：nL含0.25%胰蛋白酶的细胞消化液。平放培养瓶，轻轻摇匀。置于37℃的二氧化碳细胞培养箱中消化2 min左右，置于显微镜下观察，如果细胞圆缩、细胞间隙加大、有成片或数个细胞脱落时，应立即加入等体积的细胞完全培养基，摇匀，终止消化。

4）离心：把细胞悬液吸入离心管中，3000r/min 离心5min~7min。吸弃上清液，加1mL~2mL细胞完全培养基，重悬细胞。

5）接种：待细胞分散均匀后，吸取适量细胞悬液于新的细胞培养瓶中并补充细胞完全培养基至10 mL。将细胞培养瓶置于37℃、5%二氧化碳细胞培养箱中培养。

6）观察：每天观察细胞生长情况，当细胞单层布满培养皿时，即可用于试验。

细胞冻存与复苏：

1）冻存：实验前准备工作完成后，取出要冻存的细胞，选用的是生长状态良好、处于生长对数期的细胞。弃去旧培养基，加入2mL PBS，充分润洗后吸弃，加入消化液消化，方法同5.1.1.3。离心后吸弃上清液，加入细胞冻存液2.5mL~3mL，反复吹打至细胞成悬液，分装于冻存管中。标记细胞名称和代次、冻存时间、操作者名字等，放入冻存盒中，先在4℃冰箱中放置4h，再转入-20℃冰箱中4h，再置入-80℃冰箱中6h~12h。第2d移入液氮罐中，保存备用。

2）复苏：从液氮罐中取出要复苏细胞的冻存管，置于37℃水浴迅速摇晃至融化。待完全融化后，离心，弃去上清。加入细胞完全培养基，吹打均匀使细胞重悬，吸入适量到新的细胞培养瓶中并补充细胞完全培养基至10 mL，使培养瓶中的细胞均匀分布，标记好细胞种类、日期等详细信息。将细胞培养瓶放置于37℃、5%二氧化碳细胞培养箱中培养。每日观察细胞生长情况。